酵母双杂交筛选与组蛋白去乙酰化酶HDAC1相互作用的蛋白

酵母双杂交筛选与组蛋白去乙酰化酶HDAC1相互作用的蛋白

作者:师大云端图书馆 时间:2019-06-12 分类:硕士论文 喜欢:1510
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【摘要】由HDACs和HATs介导的组蛋白乙酰化异常是导致肿瘤产生的主要原因之一。本文意在通过构建真核细胞中表达的重组质粒pGBKT7-HDACl,在酵母双杂交系统中筛选HeLa基因组cDNA文库中与组蛋白去乙酰化酶1(HDACl)相互作用的蛋白,为更好地寻找治疗癌症的药物靶标打下基础。从癌HeLa细胞中用Trizol一步法提取总RNA,用Invitrogen反转录试剂盒进行反转录合成cDNA,利用PCR技术扩增出HDAC1基因完整编码区序列,通过DNA重组技术构建含HDAC1片段的真核表达载体pGBKT7-HDACl,重组入载体pGBKT7,检测其对酵母细胞AH109无毒性?#21442;?#33258;激活报告基因活性,然后将其与已转入HeLa基因组cDNA文库的酵母菌进行融合并进行筛选和验证,经过免疫共沉淀试验证实了HDAC1重组质粒与Fhl2重组质粒共转染293FT细胞时,二者产生了相互作用。论文成功构建了重组质粒pGBKT7-HDACl并经酶切鉴定得到证实,将重组质粒pGBKT7-HDACl在原核细胞内表达并经Westem印迹?#27835;?#35777;实HDAC1的表达。免疫共沉淀实验结果表明,HDAC1蛋白能与FHL2蛋白结合合,而阴性对照不能结合,?#24471;鱄DAC1能特异结合FHL2。构建的含HDAC1片段的原核表达载体pGBKT7-HDAC在原核细胞中能表达HDAC1蛋白,HDAC1与FHL2有相互作用性,在蛋白水平下二者可能彼此相互调控,HDAC1可能作为调节FHL2的另外一种机制,在癌症的发生发展过程中发挥重要作用。
【作者】封雪;
【导师】周晓魏;李朝;李宪臻;
【作者基本信息】大连工业大学,发酵工程,2009,硕士
【关键词】组蛋白去乙酰化酶1;酵母双杂交;免疫共沉淀;

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